L'électrophorèse est une technique de laboratoire réalisée dans le but de séparer les molécules en fonction de leur taille et de leur charge électrique afin de pouvoir diagnostiquer des maladies, de vérifier l'expression des protéines ou d'identifier des micro-organismes.
L'électrophorèse est une procédure simple et peu coûteuse, utilisée dans les routines de laboratoire et dans les projets de recherche. Selon le but de l'électrophorèse, il peut être nécessaire de réaliser d'autres tests et examens pour arriver à un diagnostic, par exemple.
Pourquoi est-ce
L'électrophorèse peut être réalisée à plusieurs fins, à la fois dans des projets de recherche et dans le diagnostic, car il s'agit d'une technique simple et peu coûteuse. Ainsi, l'électrophorèse peut être réalisée pour:
- Identifier les virus, champignons, bactéries et parasites, cette application étant plus courante dans les projets de recherche;
- Test de paternité;
- Vérifiez l'expression des protéines;
- Identifier les mutations, utiles dans le diagnostic des leucémies, par exemple;
- Analyser les types d'hémoglobine circulante, utile dans le diagnostic de la drépanocytose;
- Évaluez la quantité de protéines présentes dans le sang.
Selon le but de l'électrophorèse, il peut être nécessaire de réaliser d'autres tests complémentaires pour que le médecin puisse compléter le diagnostic.
Comment ça se fait
Pour faire l'électrophorèse, il est nécessaire le gel, qui peut être du polyacrylamide ou de l'agarose selon l'objectif, un tampon d'électrophorèse et une cuve, un marqueur de poids moléculaire et un colorant fluorescent, en plus d'un équipement de lumière UV ou LED, également connu sous le nom de transilluminateur.
Après avoir préparé le gel, un objet spécifique doit être placé pour faire les puits dans le gel, communément appelé le peigne, et laisser le gel prendre. Lorsque le gel est prêt, appliquez simplement les substances dans les puits. Pour cela, un marqueur de poids moléculaire doit être placé dans l'un des puits, un contrôle positif, qui est la substance dont on sait ce que c'est, un contrôle négatif, qui garantit la validité de la réaction, et les échantillons à analyser. Tous les échantillons doivent être mélangés avec un colorant fluorescent, car de cette façon, il est possible de visualiser les bandes sur le transilluminateur.
Le gel avec les échantillons doit être placé dans la cuve d'électrophorèse, qui contient la solution tampon spécifique, puis l'appareil est mis en marche pour qu'il y ait un courant électrique et, par conséquent, une différence de potentiel, ce qui est important pour la séparation des particules selon à leur charge et à leur taille. Le temps de fonctionnement électrophorétique varie en fonction de l'objectif de la procédure et peut durer jusqu'à 1 heure.
Après le temps déterminé, il est possible de visualiser le résultat de l'analyse électrophorétique à travers le transilluminateur. Lorsque le gel est placé sous lumière UV ou LED, il est possible de visualiser le motif de bande: plus la molécule est grosse, moins elle migre, se rapprochant du puits, tandis que plus la molécule est légère, plus le potentiel migratoire est grand.
Pour que la réaction soit validée, il est nécessaire que les bandes du contrôle positif soient visualisées et que dans le contrôle négatif rien ne soit visualisé, sinon cela indique qu'il y a eu contamination, et l'ensemble du processus doit être répété.
Types d'électrophorèse
L'électrophorèse peut être réalisée à des fins différentes et, selon son objectif, plusieurs types de gel peuvent être utilisés, les plus courants étant le polyacrylamide et l'agarose.
L'électrophorèse pour identifier les micro-organismes est plus courante dans les laboratoires de recherche, cependant, à des fins de diagnostic, l'électrophorèse peut être utilisée pour identifier les maladies hématologiques et les maladies qui évoluent avec l'augmentation de la quantité de protéines, étant les principaux types d'électrophorèse:
1. Électrophorèse de l'hémoglobine
L'électrophorèse de l'hémoglobine est une technique de laboratoire réalisée pour identifier les différents types d'hémoglobine circulant dans le sang, permettant d'identifier la présence de maladies liées à la synthèse de l'hémoglobine. Le type d'hémoglobine est identifié au moyen d'une électrophorèse à un pH spécifique, idéalement entre 8,0 et 9,0, avec un schéma de bandes en cours de vérification qui peut être comparé au schéma normal, permettant l'identification de la présence d'hémoglobines anormales.
Pourquoi est-il fait pour: L'électrophorèse de l'hémoglobine est effectuée pour étudier et diagnostiquer les maladies liées à la synthèse de l'hémoglobine, telles que la drépanocytose et la maladie de l'hémoglobine C, en plus d'être utile pour différencier la thalassémie. Apprenez à interpréter l'électrophorèse de l'hémoglobine.
2. Électrophorèse des protéines
L'électrophorèse des protéines est un examen demandé par le médecin pour évaluer la quantité de protéines circulant dans le sang et, ainsi, pour identifier les maladies. Ce test est réalisé à partir d'un échantillon de sang, qui est centrifugé pour obtenir le plasma, la partie du sang constituée, entre autres substances, par des protéines.
Après l'électrophorèse, un motif de bandes peut être visualisé et, par la suite, un graphique dans lequel la quantité de chaque fraction de protéines est indiquée, étant fondamentale pour le diagnostic.
Pour quoi elle est faite: L'électrophorèse des protéines permet au médecin d'étudier la survenue d'un myélome multiple, d'une déshydratation, d'une cirrhose, d'une inflammation, d'une maladie du foie, d'une pancréatite, d'un lupus et d'une hypertension selon le schéma de bande et le graphique présentés dans le rapport d'examen.
Comprenez comment cela se fait et comment comprendre le résultat de l'électrophorèse des protéines.
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Bibliographie
- BIOSPHÈRE ENCYCLOPÉDIE, CENTRE SCIENTIFIQUE DU SAVOIR. Électrophorèse: concepts et applications. 2015. Disponible sur :. Consulté le 24 sept. 2019
- KASVI. Qu'est-ce que l'électrophorèse et pourquoi est-ce important?. Disponible en: . Consulté le 24 sept. 2019
